Phos-tag SDS-PAGE データ集 tau

Tau (His-tag, Human, Recombinant)

Non-glycosylated and non-phosphorylated form of the 441 amino acidTau splice variant. Tau is thought to promote normal microtubuleassembly and stabilize microtubules in vivo. Hyperphosphorylated andglycated Tau tends to self-assemble and form paired helical filaments(PHFs), which are the basic structural components of neurofibrillarytangles (NFTs). NFT accumulation correlates with the clinicalprogression of Alzheimer’s Disease.
Mw: 60,000

泳動結果

Tauを，GSK3β, cdk5/p35, PKAの各キナーゼでin vitroリン酸化しました。
反応によって生じたTauのリン酸化種を解析しています。

１次元目にNEPHGE（固定化pH勾配等電点電気泳動）
２次元目に通常のSDS-PAGE あるいはMn²⁺-Phos-tag SDS-PAGEで分離しています。

NEPHGEは塩基性タンパク質に適した等電点電気泳動法のようなもので，
酸性側から塩基性側に向かってタンパク質を移動させます。

各キナーゼでリン酸化されたTauは，
通常のSDS-PAGE でもシフトアップするリン酸化種があります。
NEPHGEでは，リン酸基の数に応じて，酸性側にシフトして分離されます。
2D (NEPHGE/SDS-PAGE)において，
リン酸化種は，酸性側に寄り，シフトアップしていることがわかります。

Mn²⁺-Phos-tag SDS-PAGE では，
各キナーゼでリン酸化されたTauは，たくさんのシフトアップバンドが見られます。
2D (NEPHGE/Mn²⁺-Phos-tag SDS-PAGE)において，
リン酸化種は，酸性側に寄り，シフトアップしています。

2Dで解析することによって，
Mn²⁺-Phos-tag SDS-PAGEで分離されたバンドと
それに含まれるリン酸基の数の関係が判明します。

Tau (His-tag, Human, Recombinant)

泳動結果

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